단백질 검출 (1)
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작성일 18-12-24 09:57
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또한 뷰렛 반응에 비해
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실험결과/기타
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설명
단백질 검출 (1)
단백질 검출 (1)
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순서
다. 또한 닌히드린 반응에서 알부민은 같은 실험에서 뚜렷하게 보라색을 띠었던 우유와는 달리 희미한 보라색만을 …(투비컨티뉴드 ) 띠었다.
젤라틴, 설탕, 증류수에서는 역시 눈에 띄는 변화가 일어나지 않았다. 실제 실험을 해 본 결과, 설탕과 증류수가 세 실험 모두에서 반응이 일어나지 않을 것이라는 예상은 맞았지만, 세 실험 모두에서 젤라틴과 알부민, 우유가 반응할 것이라는 예상은 맞지 않았다. 닌히드린 반응은 시료의 pH가 중성이어야 하며 유리된 카복실기나 아미노기를 적어도 1개를 가져야 하고, 100℃의 온도에서 착색물이 생성된다 이러한 조건들을 생각해 보았을 때, 젤라틴은 단백질이긴 하지만 트립토판 등 벤젠핵을 가진 아미노산들은 결여되어 있으므로 크산토프로테인 반응에서 발색이 일어나지 않은 것이다. 크산토프로테인 반응에서도 역시 알부민은 뚜렷하게 황색을 띤 우유와는 달리 연한 담황색을 띠었다. 설탕은 당으로 이루어진 탄수화물의 일종이고, 증류수는 아미노산이 포함되지 않은 순수한 화합물이기 때문에 펩티드 결합 뿐만 아니라 아미노산 자체가 존재하지 않아서 전혀 반응이 일어나지 않을 것이라고 예상했다. 닌히드린 반응에서 젤라틴이 반응하지 않은 이유로는 몇 가지를 추측할 수 있는데, 일단 시료의 pH가 중성이 아니었을 가능성이 있다 젤라틴의 등정점은 pH 4.7정도이지만, 실험실에서 제공된 시료의 pH를 실제로 측정(測定) 해서 중성임을 확인하지 않았으므로 가능성을 열어 둘 수 있다 또 닌히드린 반응에서는 단백질의 분자량이 크면 클수록 반응이 빨리 일어나는데, 젤라틴은 분자량이 15000~250000정도로 불균일하기 때문에 실험에 사용된 젤라틴이 분자량이 작은 경우 제한된 실험 시간 내에 반응을 watch하지 못했을 수도 있다 마찬가지의 이유로 알부민이 옅은 보라색만을 띤 이유도 추측할 수 있다 알부민은 61000~67000정도의 분자량을 가지는데, 여러 단백질이 섞여 있는 우유보다 최대 분자량이 작기 때문에 반응에 더 오랜 시간이 걸려서 실험 시간 내에 선명한 보라색을 watch하지 못했을 가능성이 높다.
젤라틴 설탕 알부민 증류수 우유
2) 토의
실험을 하기 전에 사전 조사한 바로는 젤라틴과 알부민, 우유가 단백질이었으므로 크산토프로테인과 뷰렛, 닌히드린 반응 모두에서 세 시료가 반응할 것이라고 생각하였다.
위에서 언급한 실제 실험 결과들이 예상과 달랐던 이유에 대하여 고찰해 보았다.
젤라틴 설탕 알부민 증류수 우유
(3) 닌히드린 반응
←닌히드린 용액을 넣고 중탕한 후
우유는 뚜렷하게 보라색이 나타났고, 알부민은 연한 보라색을 나타내며 불투명해 졌고, 나머지 젤라틴과 설탕, 증류수에서는 변화를 watch할 수 없었다. 젤라틴은 크산토프로테인과 닌히드린 용액을 이용한 실험에서는 반응을 거의 보이지 않았다.
단백질의 발색 반응 세 가지를 비교한 결과, 크산토프로테인 반응과 닌히드린 반응은 뷰렛 반응에 비해 발색이 일어나기 위한 시료의 조건이 복잡하고 끓는 물에 중탕을 해야 하는 등 과정이 번거로웠다.
젤라틴 설탕 알부민 증류수 우유
←5분간 중탕한 후
백색 침전물이 생겼던 알부민은 미황색으로 변했으며, 역시 백색 침전물이 생겼던 시료인 우유는 진한 황색을 띤다.
단백질 검출 (1) , 단백질 검출 (1)기타실험결과 , 단백질 검출
단백질의 검출
결과 레포트(report)
1) 결과
(1) 크산토프로테인 반응
←중탕 전, 1mL의 질산만을 가한 상태
백색 침전물이 생긴 시험관은 알부민과 우유 두 가지였으며, 우유는 이미 노란빛을 띠고 있다
나머지 젤라틴, 설탕, 증류수에서는 아무런 변화도 일어나지 않았다. 우선, 크산토프로테인 반응에서 발색이 일어나기 위해서는 단백질에 벤젠핵이 있어야 한다.
(2) 뷰렛 반응
←NaOH용액과 황산구리 수용액을 넣은 후
젤라틴과 알부민, 우유만 자색으로 변했으며 설탕과 증류수에서는 변화가 나타나지 않았다. 먼저, 젤라틴이 뷰렛 반응에서만 반응하고 크산토프로테인과 닌히드린 용액을 이용한 실험에서는 반응하지 않았던 이유를 알아내기 위해 반응이 일어나기 위한 조건들을 살펴보았다.
