그람 염색 및 미생물 동정
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작성일 18-12-14 23:18
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슬라이드로부터 더 이상 보라색이 흘러나오지 않을 때 까지 실시
-Note: 이 단계가 가장 중요함 - 충분히 탈색시키지 않으면 Gram(-)균이더라도 Gram(+)균으로 보이는 오류를 범할 수 있다
-Note: 너무 오랫동안 탈색하지 않도록 한다 - 고정되었던 균이 씻겨나감
10.5초간 증류수로 세척한다.
8. 5초간 증류수로 세척한다.
-Note: 원을 마킹한 반대 면에 떨어뜨린다 마킹한 면에 어뜨리면 추후 알코올에 의하여 다 지워지며 observe부위를 찾기가 어렵다.
11.Safranin(counter stain)을 떨어뜨린 후 1분간 염색시킨다.
14.현미경으로 그람염색성을 observe한다.(400X)
實驗결과
B.cereus
E.coli
S.aureus
색
보라
빨강
보라
그람염색성
양성
음성
양성
B.cereus(x400)
]E.coli(x400)
S.aureus(x400)
Gram(+)균 B.cereus, s,aureus는 보라색을 띄고 Gram(-) 붉은색을 띈다.
12.5초간 증류수로 세척한다.
9.Etanol을 10회정도 떨어뜨려 충분히 탈색시킨다.
그람 염색 및 미생물 동정
實驗목적
그람염색에 의한 세균 감별염색방법과 염색의 원리를 익히고, 미생물의 그람양성 및 그람음성을 판별해 본다.
-Note: 균을 표면에 존재하므로 루프에 너무 힘을 주어 배지를 뜨지 않도록 한다 實驗결과에 effect(영향) 을 미침
4. 알코올램프의 불꽃 위를 수회 통과시키면서 Heat-fix(가열고정)한다.
13.흡수지를 반으로 접고, 그 사이에 슬라이드글라스를 넣고 살짝 눌…(省略) 러 물기를 제거한다.
고찰
그람 염색성의 차이는 세균의 표면, 특히 세포벽의 화학구조의 차이에 의해 나타난다.
6. 5초간 증류수로 세척한다.
-Note: 증류수를 한 방울 떨어뜨린 뒤 흡수지를 이용하여 직경 5mm정도만 남기면 좋다 증류수 양이 많으면 건조시간이 오래 걸린다.
3. 고체배지에서 18~24 시간동안 배양된 균을 백금루프(inoculating loop)로 살짝 떠서 슬라이드 글라스 위의 증류수에 잘 푼다.
-Note: Over heat하지 말 것.
5. Crystal violet 염색액(primary dye)을 떨어뜨리고 30초간 염색시킨다.
2. 슬라이드글라스 중앙부 원위에 증류수를 소량 떨어뜨린다. 균은 crystal violet 염색액과 iodine용액(착색)을 反應하는 과정에서 복합체를 형성하게 되며 이때 생긴 복합체가 양성균과 음성균을 구분하는데에 큰 역할을 한다는 것을 알 수 있다
그람 염색법에 의해 자주색으로 변하는 세균은 그람 양성균으로 그람 양성균의 세포벽에는 지질이 없고 여러층의 peptidoglycan층이 두껍게 감싸고 있는데 약 80-90%를 차지하며 이로인해 처음에 보라색으로 염색하고 탈색하고 붉은색으로 재염색을 하는 과정에서 탈색 시에 alchol에 의한 탈수로 세포벽이 더욱 치밀하게 됨으로써 peptidoglycan이 수축되어 복합체가 빠져나가지 못해 즉, 염색약이 빠지지 않아 보라색을 띄게된다 반면에 그람 음성균의 세포벽은 양성균보다 지질함량이 많고 peptidoglycan이 수축되어 복합체가 빠져나가지 못해 즉, 염색약이 빠지지 않아 보라색을 띄게된다 반면에 그람 음성균의 세포벽은 양성균보다 지질함량이 많고 peptidoglycan층이 엷은 단일층이며 외부에는 인지질, lipoplysaccaride, lipoprotein 등으로 구성된 외막이 감싸고 있는 형태로 이루어져 탈색 시에 지방component이 풍부한 lipoplysaccaride로 인해 유기용매 알코올에 분해되어 peptidoglycan층에 침전한 crystal violet/요오드복합체는 쉽게 추출되어 즉, 염색약이 잘 빠져나오게 되어 재염색과정을 통해 빨강색을 띄게된다
B.cereus
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실험결과/생물의학
그람 염색 및 미생물 동정
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다.
實驗방법
1. 슬라이드글라스에 균명을 기입하고, 뒷면 중앙부에 펜으로 직경 5~10mm의 원을 그린다.
7. iodine용액(moordant)을 떨어드리고 1분간 反應시킨다.
